KHASNA, Firyal Nida (2024) Optimasi Produksi Enzim Rekombinan MMLV (Moloney Murine Leukimia Virus) Reverse Transcriptase Pada Sistem Ekspresi Escherichia coli Skala Bioreaktor. Skripsi thesis, Universitas Jenderal Soedirman.

	PDF (Cover) COVER-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Download (55kB)
	PDF (Legalitas) LEGALITAS-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only Download (861kB)
	PDF (Abstrak) ABSTRAK-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Download (46kB)
	PDF (BabI) BAB I-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only until 27 August 2025. Download (154kB)
	PDF (BabII) BAB II-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only until 27 August 2025. Download (172kB)
	PDF (BabIII) BAB III-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only until 27 August 2025. Download (434kB)
	PDF (BabIV) BAB IV-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only Download (654kB)
	PDF (BabV) BAB V-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Download (40kB)
	PDF (DaftarPustaka) DAFTAR PUSTAKA-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Download (197kB)
	PDF (Lampiran) LAMPIRAN-Firyal Nida Khasna-B1A020035-Skripsi-2024.pdf Restricted to Repository staff only Download (602kB)

Abstract

Moloney Murine Leukimia Virus Reverse Transcriptase (MMLV-RT) merupakan enzim rekombinan yang digunakan untuk sintesis complementary DNA (cDNA) dari RNA. Enzim RT digunakan pada proses Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) untuk analisis ekspresi gen, mendeteksi virus dengan materi genetik RNA, dan penelitian biologi molekuler lainnya. Namun, produksi enzim RT pada skala bioreaktor masih relatif jarang, terhitung dari jurnal yang dipublikasikan. Penelitian ini bertujuan untuk memproduksi enzim rekombinan MMLV-Reverse Ttranscriptase yang diinsersikan ke dalam plasmid pD451SR_MMLV-RT dengan Esherichia coli BL21 star (DE3) sebagai inang dan metode auto-induksi tanpa menggunakan IPTG pada skala bioreaktor. Oleh karena itu, diperlukan optimasi parameter yang berpengaruh penting terhadap hasil produksi enzim dalam skala bioreaktor, yaitu kecepatan agitasi, laju aerasi, dan konsentrasi inokulum. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Genomik, Pusat Riset Mikrobiologi Terapan, Badan Riset dan Inovasi Nasional. Metode penelitian ini menggunakan pendekatan eksperimental untuk mendapatkan kondisi optimum berupa kecepatan agitasi, laju aerasi, dan konsentrasi inokulum dari beberapa variasi yang diuji. Variabel bebas yang diamati adalah kecepatan agitasi, laju aerasi, dan konsentrasi inokulum, sedangkan variabel terikat adalah kuantitas atau jumlah enzim yang dihasilkan dan aktivitas enzim. Parameter yang diamati meliputi Optical Density (OD600) dan konsentrasi protein berdasarkan hasil perlakuan optimasi kecepatan agitasi, laju aerasi, dan konsentrasi inokulum. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai kecepatan agitasi, laju aerasi dan konsentrasi inokulum yang optimum untuk memproduksi enzim MMLV-Reverse Ttranscriptase skala bioreaktor. Penelitian ini berhasil mendapatkan kondisi optimum untuk produksi enzim rekombinan MMLV-Reverse Ttranscriptase pada agitasi 300 rpm, aerasi 3 vvm, dan konsentrasi inokulan 5%. Sebanyak 35,6 mg/L enzim rekombinan MMLV-Reverse Transcriptase berhasil dimurnikan pada kondisi optimum tersebut, sehingga menghasilkan peningkatan hasil protein sebesar 3,78 kali lipat dari crude extract. Selain itu, enzim rekombinan MMLV-Reverse Ttranscriptase juga menunjukkan aktivitas spesifik sebesar 11394,4 U/mg. Penelitian ini masih perlu dikembangkan pada buffer storage enzim tersebut dengan tujuan mencegah denaturasi dan penurunan aktivitas.

Actions (login required)

View Item